確保充分的細(xì)胞生長(zhǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)和收集精-確數(shù)據(jù)的一個(gè)關(guān)鍵部分。對(duì)于單層生長(zhǎng)的細(xì)胞，融合度定義為顯微鏡觀察到被一層細(xì)胞覆蓋的培養(yǎng)器皿表面積的百分比。比如，50%細(xì)胞融合是指一半的培養(yǎng)皿/瓶等的表面被細(xì)胞覆蓋。對(duì)于懸浮細(xì)胞，通常用細(xì)胞系或類型的細(xì)胞密度衡量其生長(zhǎng)過(guò)程，但或許也可通過(guò)濁度增加和培養(yǎng)基顏色穩(wěn)定評(píng)估“融合“。

培養(yǎng)中的細(xì)胞生長(zhǎng)一般發(fā)生在四個(gè)階段，隨著時(shí)間推移的細(xì)胞計(jì)數(shù)的對(duì)數(shù)形成一個(gè)S型曲線(S-型)，不同細(xì)胞系和培養(yǎng)物在每個(gè)階段需要的時(shí)間有很大差異。

1.停滯期：細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)條件的階段，細(xì)胞在此階段不分裂。細(xì)胞通常在起始培養(yǎng)后的24小時(shí)內(nèi)附著，該階段的總時(shí)長(zhǎng)取決于培養(yǎng)之初使用細(xì)胞的生長(zhǎng)階段和接種密度。

2.對(duì)數(shù)期：細(xì)胞在此階段積極分裂，是評(píng)估群體生長(zhǎng)和通用數(shù)據(jù)收集的-佳時(shí)間。對(duì)數(shù)期的后期，過(guò)度擁擠導(dǎo)致細(xì)胞脅迫之前是傳代細(xì)胞(亞培養(yǎng))的-佳時(shí)機(jī)。

3.平穩(wěn)期：隨著細(xì)胞達(dá)到100%融合，細(xì)胞在此階段生長(zhǎng)放緩，不足1/10的細(xì)胞處于活躍細(xì)胞周期。細(xì)胞在此階段容易受傷，因此需要小心觀察以確保細(xì)胞在此階段之前或之初進(jìn)行傳代。

4.衰退期：細(xì)胞周期的自然組成部分。在此階段，隨著細(xì)胞死亡占據(jù)主導(dǎo)地位，活細(xì)胞群體數(shù)量減少。

評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)

準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)評(píng)估培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)是至關(guān)重要，因?yàn)殄e(cuò)誤的計(jì)數(shù)會(huì)導(dǎo)致關(guān)于細(xì)胞健康的錯(cuò)誤結(jié)論。細(xì)胞計(jì)數(shù)可以使用血球計(jì)數(shù)板、自動(dòng)計(jì)數(shù)器進(jìn)行。

預(yù)防和消除細(xì)胞生長(zhǎng)問(wèn)題的常規(guī)技巧和技術(shù)

1.除了遵循良好的無(wú)菌操作實(shí)踐以防止微生物和化學(xué)污染外，細(xì)胞生長(zhǎng)問(wèn)題的早期診斷和處理的關(guān)鍵是對(duì)培養(yǎng)物的頻繁觀察和詳細(xì)的記錄保存。

2.同樣重要的是需要考慮解決問(wèn)題-有效的方式是詳細(xì)和耗時(shí)的尋找細(xì)胞生長(zhǎng)不佳的罪魁禍?zhǔn)?，還是-好簡(jiǎn)單地使用新的試劑、儲(chǔ)存液和物資重新開(kāi)始。

仔細(xì)地觀察

為了解決細(xì)胞生長(zhǎng)問(wèn)題，必須首先意識(shí)到問(wèn)題的存在。許多生長(zhǎng)問(wèn)題都是微妙的，所以定期、詳細(xì)的觀察實(shí)驗(yàn)中所有培養(yǎng)器皿是非常必要的。顯微鏡下的快速評(píng)估可能是不夠的，許多特殊的生長(zhǎng)模式在細(xì)胞固定和染色之前并不明顯。另外，仍需定期檢查培養(yǎng)基和其他試劑是否污染。

精-確記錄

當(dāng)試圖診斷和解決細(xì)胞生長(zhǎng)不良的問(wèn)題時(shí)，擁有關(guān)于培養(yǎng)各個(gè)方面的好筆記可以節(jié)省時(shí)間、金錢(qián)和珍貴的修飾細(xì)胞如敲除細(xì)胞系。比如，標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞密度、記錄儲(chǔ)存細(xì)胞的傳代次數(shù)對(duì)判斷儲(chǔ)存液是否可能為問(wèn)題來(lái)源至關(guān)重要。同樣，在得出某批次培養(yǎng)基是罪魁禍?zhǔn)椎慕Y(jié)論之前，必須首先確保哪些培養(yǎng)皿使用了這一批次。

需要記錄的重要信息包括所有凍存管的來(lái)源、身-份證明、無(wú)污染、傳代次數(shù)、細(xì)胞密度、冷凍和儲(chǔ)存方法等。使用的所有試劑的成分和濃度、批號(hào)、*打開(kāi)和使用日期都應(yīng)該記錄下來(lái)。所有培養(yǎng)器皿的批號(hào)也應(yīng)該記錄。細(xì)胞培養(yǎng)個(gè)方面的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)化和遵循，所有凍存管和培養(yǎng)器皿的精-確和詳細(xì)標(biāo)簽都是至關(guān)重要的。注意小細(xì)節(jié)，比如培養(yǎng)箱清理和保養(yǎng)的時(shí)間、CO2罐更換的時(shí)間、培養(yǎng)室后篩查支原體的時(shí)間，并記錄任何異常的事件。

知道何時(shí)止損

有時(shí)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的確切來(lái)源不像解決它那么重要，因此，立即修復(fù)多個(gè)潛在的導(dǎo)致生長(zhǎng)不良的原因比嘗試隔離確切的問(wèn)題更節(jié)約時(shí)間和成本。比如，使用新的儲(chǔ)存細(xì)胞和所有新的培養(yǎng)基、血清、緩沖液等重新開(kāi)始，比分別獨(dú)立嘗試各物料的新批次直到發(fā)現(xiàn)罪魁禍?zhǔn)赘虾跚槔怼?/p>